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    广西11选5开奖结果查询: 用于制备??谔阋逴型肽疫苗的多肽及其制备方法和用途.pdf

    摘要
    申请专利号:

    广西11选5大小走势图 www.fnjpv.tw CN201310097943.6

    申请日:

    2013.03.25

    公开号:

    CN103214560B

    公开日:

    2014.10.01

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C07K 14/09申请日:20130325|||公开
    IPC分类号: C07K14/09; C07K7/08; C07K1/06; C07K1/04; A61K39/135; A61P31/14 主分类号: C07K14/09
    申请人: 中国牧工商(集团)总公司; 中牧实业股份有限公司
    发明人: 肖进; 齐鹏; 巴利民; 栗利芳; 宋芳; 董春娜; 王楠; 张蕾; 周强; 郭丽清; 郑应华
    地址: 100070 北京市丰台区南四环西路188号11区20号楼
    优先权:
    专利代理机构: 北京瑞恒信达知识产权代理事务所(普通合伙) 11382 代理人: 李渤;张伟
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310097943.6

    授权公告号:

    103214560B||||||

    法律状态公告日:

    2014.10.01|||2013.08.21|||2013.07.24

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明提供一种用于制备??谔阋逴型肽疫苗的多肽,所述多肽包含如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列以及含有该多肽的肽疫苗。提供的??谔阋逴型合成肽疫苗具有良好的免疫效力,并且不会引发传统疫苗存在的发热、红肿等问题,因此本发明的疫苗可以有效应对目前口蹄疫病毒的抗原变异、不存在生物安全性,易于大规模合成,具有良好的应用前景。本发明还提供了所述多肽和肽疫苗的制备方法以及其制药用途。

    权利要求书

    权利要求书
    1.   一种用于制备??谔阋逴型肽疫苗的多肽,其特征在于,所述多肽包含如SEQ ID NO. 1所示的氨基酸序列。

    2.   根据权利要求1所述的多肽,其特征在于,所述多肽还包含具有增强免疫作用的口蹄疫内源或外源性T细胞表位氨基酸序列,其中,所述氨基酸序列选自SEQ ID NO. 2、SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 4中的一个或多个;
    优选地,所述多肽包含如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO. 6或SEQ ID NO. 7所示的氨基酸序列。

    3.   根据权利要求2所述的多肽,其特征在于,所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO. 6或SEQ ID NO. 7所示;
    优选地,所述多肽的氨基酸序列中的两个半胱氨酸的巯基经氧化连接在一起形成二硫键;
    进一步优选地,所述多肽的氨基酸序列的首尾氨基酸残基之间反应形成共价连接;
    更优选地,所述多肽的氨基酸序列的首尾氨基酸残基的羧基与氨基、或者羧基与羟基之间反应形成共价连接。

    4.   根据权利要求1至3中任一项所述的多肽的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
    (1)以氨基树脂为起始原料,以由9?芴甲氧羰基?;さ陌被嵛ヌ?,按照所述氨基酸序列依次缩合接上氨基酸以合成所述多肽,每步缩合反应后用乙酰咪唑封闭未反应的氨基端;
    (2)合成完毕后加入裂解试剂,从而将所述多肽从氨基树脂上裂解下来;
    (3)使用乙醚沉淀所述多肽;和
    (4)对所述多肽进行超滤纯化,然后进行无菌处理。

    5.   根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)包括以下步骤:
    (1?a)脱?;し从Γ航被髦糜谔寤俜直任?5?30%的六氢吡啶的N?甲基吡咯烷酮溶液中,在20?28℃条件下反应25?40分钟,从而脱除氨基树脂上的9?芴甲氧羰基?;せ?;
    (1?b)洗涤:氮气吹干,然后用N?甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂;
    (1?c)缩合反应:加入1?羟基苯丙三唑、二环己基碳二亚胺与由9?芴甲氧羰基?;さ陌被?,然后在20?28℃条件下反应0.5?2.5小时;
    (1?d)洗涤:氮气吹干,然后用N?甲基吡咯烷酮洗涤氨基树脂;和
    (1?e)封闭反应:加入重量体积百分比为1.5?4%的乙酰咪唑的N?甲基吡咯烷酮溶液,在20?28℃条件下反应20?40分钟。

    6.   根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中裂解试剂的组分为体积比为85:8:6:1的三氟乙酸:三异丙基硅烷:苯酚:H2O;
    优选地,所述步骤(2)的裂解时间为1?4小时。

    7.   根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法的步骤(3)中还包括:
    (3?a)使用乙醚沉淀所述多肽,然后用二甲基甲酰胺洗涤;
    (3?b)在加入占反应体系总体积10%的二甲基亚砜情况下,使沉淀得到的多肽的氨基酸序列中两个半胱氨酸之间形成二硫键;和
    (3?c)使所述多肽的氨基酸序列的首尾氨基酸残基之间反应形成共价连接;优选地,在加入占反应体系总体积1%的二异丙基碳二亚胺和0.5%的1?羟基?7?偶氮苯并三氮唑情况下使所述多肽的氨基酸序列的首尾氨基酸残基的羧基与氨基、或者在加入0.1M H2SO4情况下使羧基与羟基之间反应形成共价连接。

    8.   根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(4)包括以下步骤:
    (4?a)使用切向过滤膜包在20?28℃条件下超滤所述多肽,从而除去小分子杂质;和
    (4?b)使用0.2微米在线滤器除菌保存。

    9.   一种??谔阋逴型肽疫苗,其特征在于,所述肽疫苗包含一种或多种根据权利要求1至3中任一项所述的多肽。

    10.   根据权利要求9所述的肽疫苗,其特征在于,所述肽疫苗还包含佐剂;
    优选地,所述佐剂为选自白油、50V、50VII中的一种或多种;
    进一步优选地,所述肽疫苗中所包含的多肽和佐剂的体积比为1:1。

    11.   根据权利要求9或10所述的肽疫苗的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:
    (1)用注射用水将所述多肽稀释为50μg/ml的浓度,从而得到多肽抗原水相;
    (2)将佐剂在121℃条件下灭菌30分钟;和
    (3)在20?28℃条件下,按照所述多肽抗原水相与所述佐剂1:1的体积比,先将佐剂加入乳化罐内,在90?150转/分钟下搅拌1.5?3分钟,然后缓慢加入多肽抗原水相,然后搅拌20?30分钟,再在8000?10000转/分钟下搅拌15?30分钟,静置5分钟,分装。

    12.   根据权利要求1至3中任一项所述的多肽或者根据权利要求9或10所述的肽疫苗在制备用于预防??谔阋逴型的药物中的用途。

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    用于 制备 口蹄疫 疫苗 多肽 及其 方法 用途
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