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    广西11选5走势图查询: 一种发形霞水母硫氧还蛋白及其编码基因与应用.pdf

    摘要
    申请专利号:

    广西11选5大小走势图 www.fnjpv.tw CN201310189933.5

    申请日:

    2013.05.21

    公开号:

    CN103232979B

    公开日:

    2014.10.01

    当前法律状态:

    授权

    有效性:

    有权

    法律详情: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12N 9/02申请日:20130521|||公开
    IPC分类号: C12N9/02; C12N15/53; C12N15/70; A61K38/44; A61K8/66; A61P39/06; A61Q19/08; A23L3/3571 主分类号: C12N9/02
    申请人: 中国人民解放军第二军医大学
    发明人: 阮增良; 柳国艳; 张黎明; 赵杰; 温小娟; 尹慢慢; 陆佳; 刘丹
    地址: 200433 上海市杨浦区翔殷路800号
    优先权:
    专利代理机构: 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 代理人: 赵青
    PDF完整版下载: PDF下载
    法律状态
    申请(专利)号:

    CN201310189933.5

    授权公告号:

    103232979B||||||

    法律状态公告日:

    2014.10.01|||2013.09.04|||2013.08.07

    法律状态类型:

    授权|||实质审查的生效|||公开

    摘要

    本发明属于生物医药技术领域,目前尚未见对水母硫氧还蛋白的有关研究报道。本发明提供了一种发形霞水母硫氧还蛋白,所述的发形霞水母硫氧还蛋白,具有如SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明还提供了发形霞水母硫氧还蛋白的编码基因,具有如SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。同时,本发明还提供了发形霞水母硫氧还蛋白及其编码基因在制备抗氧化药物、抗辐射药物、皮肤防护剂、食品防腐剂、抗衰老药物等中的应用。本发明具有较大的临床应用价值。

    权利要求书

    权利要求书
    1.   一种发形霞水母硫氧还蛋白,其特征在于,所述的发形霞水母硫氧还蛋白具有如下(ⅰ)或(ⅱ)的蛋白质:
    (ⅰ)具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
    (ⅱ)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或添加一个或几个氨基酸且同等功能的由(?。┭苌牡鞍字?。

    2.   根据权利要求1所述的一种发形霞水母硫氧还蛋白,其特征在于:所述的发形霞水母硫氧还蛋白具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列,该蛋白不含信号肽,为非分泌蛋白,定位于细胞质,分子量为11.5kDa,等电点为5.1。

    3.   一种如权利要求1所述的发形霞水母硫氧还蛋白的编码基因,其特征在于,该编码基因为如下(ⅰ)或(ⅱ)的DNA分子:
    (ⅰ)具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列;
    (ⅱ)与SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列同源性在80%以上的核苷酸序列。

    4.   根据权利要求3所述的一种发形霞水母硫氧还蛋白的编码基因,其特征在于:所述的发形霞水母硫氧还蛋白的编码基因,该核苷酸序列全长479bp,包含一个315bp的开放阅读框。

    5.   一种如权利要求2所述的发形霞水母硫氧还蛋白的制备方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:
    (A)构建发形霞水母触手组织cDNA文库;
    (B)对上述发形霞水母触手组织cDNA文库重组克隆的序列进行测定和分析,获得一个编码硫氧还蛋白的核苷酸序列;
    (C)构建发形霞水母硫氧还蛋白的表达质粒,重组工程菌;
    (D)发形霞水母硫氧还蛋白的表达;
    (E)重组发形霞水母硫氧还蛋白的纯化。

    6.   根据权利要求5所述的发形霞水母硫氧还蛋白的制备方法,其特征在于:所述步骤(A)中的发形霞水母触手组织cDNA文库通过如下方法构建:
    a)抽提发形霞水母触手组织总RNA;
    b)分离mRNA,合成发形霞水母触手组织cDNA;
    c)将上述cDNA插入pUC19质粒载体,再转化至大肠杆菌DH5α中,涂布于LB培养基平板进行蓝白斑筛选,即构建成发形霞水母触手组织cDNA文库。

    7.   根据权利要求5所述的发形霞水母硫氧还蛋白的制备方法,其特征在于:所述步骤(C)中的构建发形霞水母硫氧还蛋白的表达质粒,重组工程菌,具体步骤为:
    a)设计并合成PCR引物如下:
    上游引物如SEQ ID NO:3所示,
    下游引物如SEQ ID NO:4所示,
    PCR反应条件为:95℃保温5min;95℃保温30sec,55.5℃保温30sec,68℃保温1min,30个循环;68℃保温5min;
    b)酶切回收后的PCR产物及pET24a原核表达质粒;
    c)利用两个酶切位点将编码序列连接到pET24a载体上,构建重组表达质粒,然后转化到大肠杆菌BL21获得重组工程菌。

    8.   根据权利要求5所述的发形霞水母硫氧还蛋白的制备方法,其特征在于:所述步骤(D)中的发形霞水母硫氧还蛋白的表达条件为:25℃、1mM IPTG、150rpm/min下诱导8小时。

    9.   一种如权利要求1或2所述的发形霞水母硫氧还蛋白在制备抗氧化药物、抗辐射药物、皮肤防护剂、食品防腐剂或抗衰老药物中的应用。

    10.   一种如权利要求3所述的发形霞水母硫氧还蛋白的编码基因在制备抗氧化药物、抗辐射药物、皮肤防护剂、食品防腐剂或抗衰老药物中的应用。

    关 键 词:
    一种 发形霞 水母 硫氧还蛋白 及其 编码 基因 应用
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